GFP–подобные белки могут безызлучательно обмениваться энергией. Процесс называеться FRET. На этом принципе можно делать сенсоры на протеазы: два белка сшиваются линкером, которые режется протеазой. Таким образом у конструкции два состояния: связанные белки, есть пернос, один спектр флуоресценции; второе — линкер разрезан и белки отдаляются друг от друга и спектр меняется. Можно измерять не не спектр флуоресценции, а время жизни возбужденного состояния хромофора. Последнее требует дорогой техники, сильно круче с точки зрения точности и чувствительности.
Вот молекуляраня динамика сенсора на каспазу–3: , селфмэйд.
В России есть весьма крутые спецы про GFP–подобным белкам. Например Ю.А. Лабас — он открыл что флуоресцирующие белки есть не только в медузах, С. Лукьянов — делает одни из самых крутых красных белков в мире, успешно ими по всему миру торгует.
И вообще флуоресцирующие белки попадают под понятие нано)
Написал sadsaviour
sadsaviour: Оо, круто. Я как раз сейчас CFP–YFP FRET сенсор для активации киназы Fyn делаю. Тут всё завязано не на разрезании линкера, а на изменении конформации самого биосенсора — есть специфичный для киназы субстрат и есть домен связывающийся только с фосфорилированной формой субстрата, всё это соединено линкером, а на концах — соответственно CFP и YFP. Когда киназа активна, субстрат фосфорилируется, с ним взаимодействует домен, в итоге пришитые к концам флюоресуцентные белки оказываются рядом –> fret.
Проверял биосенсор на каспазу в клетках? Если работает — тогда по–моему это вообще класная штука чтобы индукцию апоптоза в культурах смотреть.
Написал Chordate
Chordate: Проверяли — работает, но не очень. Пара: TagRFP и KFP. Надо конфокал прокачать до суперразрешающего, возможно в следующем году сделаем. Ну и с сеносором надо поработать, для этого динамика сейчас и проводится — интересно как оно себя ведет, уже даже мысли по улучшению появились)
Написал sadsaviour
Вот молекуляраня динамика сенсора на каспазу–3: , селфмэйд.
В России есть весьма крутые спецы про GFP–подобным белкам. Например Ю.А. Лабас — он открыл что флуоресцирующие белки есть не только в медузах, С. Лукьянов — делает одни из самых крутых красных белков в мире, успешно ими по всему миру торгует.
И вообще флуоресцирующие белки попадают под понятие нано)
Написал sadsaviour
sadsaviour: Оо, круто. Я как раз сейчас CFP–YFP FRET сенсор для активации киназы Fyn делаю. Тут всё завязано не на разрезании линкера, а на изменении конформации самого биосенсора — есть специфичный для киназы субстрат и есть домен связывающийся только с фосфорилированной формой субстрата, всё это соединено линкером, а на концах — соответственно CFP и YFP. Когда киназа активна, субстрат фосфорилируется, с ним взаимодействует домен, в итоге пришитые к концам флюоресуцентные белки оказываются рядом –> fret.
Проверял биосенсор на каспазу в клетках? Если работает — тогда по–моему это вообще класная штука чтобы индукцию апоптоза в культурах смотреть.
Написал Chordate
Chordate: Проверяли — работает, но не очень. Пара: TagRFP и KFP. Надо конфокал прокачать до суперразрешающего, возможно в следующем году сделаем. Ну и с сеносором надо поработать, для этого динамика сейчас и проводится — интересно как оно себя ведет, уже даже мысли по улучшению появились)
Написал sadsaviour